Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现人锥体内自身突变到浮现1型号肝炎诊断疼痛的十分困难率在青少年中后期就有很差的阐述，多个人锥体内自身突变非典型的青少年中的有70%在血清切换后10将近肺结核肝炎，而随访15年的青少年这一数目增大到84%。相比较之下，占诊断1型号肝炎一半以上的型号1型号肝炎的胃癌有助于还没有得到充分的研究课题。

愈来愈多的人开始可用有系统系统来定义1型号肝炎的十分困难：个锥体在浮现多种人锥体内自身突变时进到第1阶段，浮现人锥体内素显露现异常时进到第2阶段，浮现疼痛时进到第3阶段。一些多发人锥体内自身突变非典型的个锥体，在1期和2期，十分困难较太快，并持续发展为胃癌的1型号肝炎。我们以前阐述了一三组在首次验到多种人锥体内自身突变样本后最少10年无肝炎的极太快十分困难者，这三组病变伤亡人数少，但特征极为明确。随后，我们发现人锥体内自身肝细胞肝细胞CD8+T巨噬细胞中间锥体在十分困难相比较较太快的病变中的基本不普遍存在，但在更促使胃癌和长期普遍存在的肝炎病变中的很易于验到。这似乎证明，与十分困难病变相比较，这些病变化脓性中间锥体的可抑制增强。

早期研究课题证明，尽管可抑制性T巨噬细胞(Treg)存量较长时间，但肝炎病变普遍存在一些特性缺陷，其中的都有对IL-2的中间锥体并能降低。此外，肝炎病变中的的震荡CD4+T巨噬细胞似乎对可抑制突显抵抗性，表现为震荡T巨噬细胞的可抑制逼近，纯净产生的Treg和游离产生的作用于Treg，以及肝细胞经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2中间锥体逼近。本研究课题的借此是阐述了CD4+可抑制性T巨噬细胞(Treg)在一小群极相比较较太快十分困难者中的的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究课题是一项以人群依此的纵向研究课题，在21岁请注意确诊的病变直系亲属中的核查1型号肝炎的危险因素所。我们以前阐述了长期相比较较太快十分困难者的特征，他们保持稳定多重人锥体内自身突变非典型超过10年，但没有浮现肝炎的诊断疼痛，太快性或非透过性化脓性。随后，10名继续保持稳定无肝炎并主动给予大量血液样本的相比较较太快十分困难者纳入T和B巨噬细胞特性统计分析。在目前为止的研究课题中的，8名太快十分困难者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的人锥体内自身突变非典型。所有的行动者都始终保持1型号肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后失去了人锥体内自身突变对某些肝细胞的非典型中间锥体，然而，一名病变仍然始终保持2期最少6年，但没有浮现诊断疼痛，一名病变被诊断为肝炎，该实验者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中的对该遗传物质透过了实际上分析报告。分离显露来外周血单个质子巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞拳法和T巨噬细胞可抑制试验分析报告遗传物质中的Treg的阈值、基因型号和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、系统性联和回归)透过无监督聚类统计分析，分析报告Treg基因型号。

结果：与肥胖遗传物质相比较，来自太快十分困难锥体的知觉CD4+T巨噬细胞的监督聚类推测，酪氨酸的知觉CD4+ Treg阈值增大，与抗生素作用于的TNFR系统性酶(GITR)表述增大有关。一名HbA1c增大的病变与十分困难相比较较太快者和意味着的比对三组相比较，Treg谱有所多种不同。特性统计分析证明，与肥胖遗传物质相比较，来自相比较较太快十分困难锥体的Treg介导的CD4+震荡T巨噬细胞可抑制显著损伤。表现为对震荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的可抑制增大。

由此可知1 有系统的基因型号统计分析推测，CD4+Treg共通点号在太快十分困难队列中的增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物表述鉴定显露10个元簇:知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)可用9个多种不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个数据流代表人一个集群(100个集群)，愈来愈大的元集群(10个元集群)在数据流三组周围上色。每个数据流中的的煎饼由此可知指显露单个标示的表述级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测适度标示表述。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的表层。(e-l)相对来说稀土元素为每个metacluster箱子该线由此可知(稀土元素> 0.05%)考虑到为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T巨噬细胞(l)。白色橘色代表人理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 可用CITRUS的建模号声称，Treg阈值的增大是十分困难相比较较太快的标志。PG门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)相比较较SP行动者和意味着的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表人性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述透过分离显露来，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(布氏)三组以及遗传物质SP 606(白色)中的CD25+ cd127的阈值摘要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱子该线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风速著色，标示突显露的簇被识别为SP和HD队列间的多种不同。(j)箱子该线由此可知推测了在SP(布氏)和HD(灰点)三组中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对来说稀土元素(数目)。(k)直方由此可知推测每个簇的基因型号(粉红色)和Treg标示相对来说表述与背景表述(白色);上列，寄存器Treg_3;示意图一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中的标示的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩验

由此可知3 与肥胖献血者相比较，十分困难相比较较太快者知觉treg的GITR增大。每个知觉CD4+T巨噬细胞元簇(知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验每个表述标示的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热由此可知(sp606不都有在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(粉红色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR表述接在，推测直方由此可知(c)和摘要由此可知(d)。Wilcoxon匹配符号秩和验，p< 0.07(白色)所有遗传物质都有，p< 0.05(白色)遗传物质SP 606和意味着的HD不都有在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表述，从PG门控，从所有HD(粉红色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)接在，推测直方由此可知(e)和摘要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩验

由此可知4 来自相比较较太快十分困难的CD4+ treg巨噬细胞操纵震荡CD4+T巨噬细胞的并能降低。SP三组用白色的该线和橘色指显露，HD三组用白色的该线和橘色指显露，白色的该线/橘色指显露遗传物质sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(转发者)被标示为CFSE, Treg按观察的数目试样。用抗CD3 /28微珠再造巨噬细胞，培育3同一天透过流式巨噬细胞拳法验。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg培育(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE可抑制(a,e)和CFSE可抑制多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制多于。可用非典型比对(酪氨酸的响应巨噬细胞不含treg)推算可抑制多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较较测试

由此可知5 震荡CD4+T巨噬细胞对相比较较太快十分困难的T巨噬细胞再造的可抑制愈来愈适合于。SP三组用白色的该线和橘色指显露，HD三组用白色的该线和橘色指显露，白色的该线/橘色指显露遗传物质sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示，treg按观察的数目试样。用抗CD3 /28微珠再造巨噬细胞，培育3同一天透过流式巨噬细胞拳法(CD25反染)和巨噬细胞因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者协力培育。(a,b) CFSE可抑制(a)和CFSE可抑制多于(b)。(c,d) CD25可抑制多于(c)和CD134可抑制多于(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中的的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较较测试

论断：我们得显露的论断是，来自相比较较太快十分困难子的再造知觉CD4+Treg在GITR表述中的得到了构建和丰富，特别强调了促使研究课题Treg在1型号肝炎风险个锥体中的的举例来说的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28