Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者困难重重缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到胰脏自身HIV到注意到1HG乳癌临床研究者腹泻的成效率在青不算年时期就有很差的描述，多个胰脏自身HIV特征性的青不算年里面有70%在血清转换后10在短期内患上乳癌，而随访15年的青不算年这一人口比例增高到84%。相比之下之下，占临床研究者1HG乳癌一半以上的HG1HG乳癌的里面风机制还没有得到充分的研究者。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1HG乳癌的成效：母体在注意到多种胰脏自身HIV时带入第1收尾，注意到食欲精神状态时带入第2收尾，注意到腹泻时带入第3收尾。一些多发胰脏自身HIV特征性的母体，在1期和2期，成效较快，并发展为里面风的1HG乳癌。我们之前描述了一两组在首次验证到多种胰脏自身HIV取样后至不算10年无乳癌的亦非慢成效者，这两组患儿人数不算，但特性非常确实。随后，我们发现胰脏自身受体质特异性CD8+T细胞核反应在成效减慢的患儿里面基本不存在，但在近期里面风和一直存在的乳癌患儿里面很容易验证到。这可能证明，与成效患儿相比之下，这些患儿自身抗体的调节增强。

晚期研究者证明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量但会，但乳癌患儿存在一些功能缺陷，其里面之外对IL-2的反应能力增高。此外，乳癌患儿里面的波动CD4+T细胞核可能对调节愈来愈具抵抗性，平庸为波动T细胞核的抑止弱化，自然产生的Treg和体外产生的正向Treg，以及受体质年中的CD4+T细胞核里面IL-2反应弱化。本研究者的意在是描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群亦非减慢成效者里面的特性，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

法则：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁表列出出院的患儿亲属里面检查1HG乳癌的危险各种因素。我们之前描述了一直减慢成效者的特性，他们保持稳定多重胰脏自身HIV特征性至不算10年，但没有注意到乳癌的临床研究者腹泻，慢性或非来性虐待自身免疫。随后，10名继续保持稳定无乳癌并主动提供大量血液取样的减慢成效者纳入T和B细胞核功能分析。在目前的研究者里面，8名慢成效者(SP两组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的胰脏自身HIV特征性。所有的大多数人都西北面1HG乳癌成效的1期，尽管一些人随后无法控制了胰脏自身HIV对某些受体质的尿检，然而，一名患儿不太可能西北面2期至不算6年，但没有注意到临床研究者腹泻，一名患儿被治疗为乳癌，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该NADPH来进行了单独评核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，运用于多参数流式细胞核术和T细胞核抑止试验评核NADPH里面Treg的Hz、表HG和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)来进行无监理聚类分析，评核Treg表HG。

结果：与保健NADPH相比之下，来自慢成效体的心灵CD4+T细胞核的监理聚类推断，激活的心灵CD4+ TregHz增高，与糖皮质激素正向的TNFR相关受体(GITR)表述增高有关。一名HbA1c升高的患儿与成效减慢者和也就是说的对照两组相比之下，Treg谱有所多种不同。功能分析证明，与保健NADPH相比之下，来自减慢成效体的Treg诱导的CD4+波动T细胞核抑止突出受损。平庸为对波动CD4+T细胞核CD25和CD134表述的抑止增高。

绘出1 深入的表HG分析推断，CD4+Treg亚HG在慢成效缓冲区里面增高。由FlowSOM生成的Treg寝室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物表述鉴定出10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)适用9个多种不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个节点象征性一个空降兵(100个空降兵)，愈来愈大的元空降兵(10个元空降兵)在节点两组周围上色。每个节点里面的饼绘出说明单个标识的表述级别。(b)每个元聚类的热绘出，以推断适度标识表述。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对原子量为每个metacluster装有相绘出(原子量> 0.05%)已确定为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。红色带子象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 适用CITRUS的预测模HG确认，TregHz的增高是成效减慢的标志。分级制度门控(a - f)和柑橘分析(g-k)相对SP大多数人和也就是说的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的象征性性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行分离，三维FlowSOM群体。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)两组以及NADPHSP 606(红色)里面CD25+ cd127的Hz统计绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的装有相绘出;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD缓冲区密切关系的多种不同。(j)装有相绘出推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对原子量(人口比例)。(k)压制点推断每个簇的表HG(粉红色)和Treg标识相对表述与时代背景表述(橙色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。时代背景与所有其他簇里面标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

绘出3 与保健献血者相比之下，成效减慢者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表述热绘出(sp606不之外在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表述联接，推断压制点(c)和统计绘出(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADPH之外，p< 0.05(橙色)NADPHSP 606和也就是说的HD不之外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表述，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(红色)联接，推断压制点(e)和统计绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

绘出4 来自减慢成效的CD4+ treg细胞核压制波动CD4+T细胞核的能力增高。SP两组用橙色的两条路线和带子说明，HD两组用橙色的两条路线和带子说明，红色的两条路线/带子说明NADPHsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标识为CFSE, Treg按观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞核，指导3天后来进行流式细胞核术验证。(a-d)与CD4+转发者相对应的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止平均值。适用特征性对照(激活的两组织起来细胞核则有treg)计数抑止平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

绘出5 波动CD4+T细胞核对减慢成效的T细胞核活化的抑止愈来愈极端。SP两组用橙色的两条路线和带子说明，HD两组用橙色的两条路线和带子说明，红色的两条路线/带子说明NADPHsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标识，treg按观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞核，指导3天后来进行流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止百分率(b)。(c,d) CD25抑止百分率(c)和CD134抑止百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里面的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢成效子的活化心灵CD4+Treg在GITR表述里面得到了扩展和丰富，强调了进一步研究者Treg在1HG乳癌风险母体里面的异质性的必要性。

译者出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28