Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中都逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身免疫球抗原到用到1改型癌症流行病学病征的的发展率在成年人末期就有很好的说明了，多个胰脏自身免疫球抗原非典改型的成年人里面有70%在血清转换成后10年内患癌症，而随访15年的成年人这一%-增大到84%。来得之下，占到流行病学1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的病症机制还很难取得必要的分析。

越来越多的人开始适用分期系统来假设1改型癌症的的发展：个形体在用到多种胰脏自身免疫球抗原时转至第1过渡期，用到食欲异常时转至第2过渡期，用到病征时转至第3过渡期。一些多发胰脏自身免疫球抗原非典改型的个形体，在1期和2期，的发展较慢，并发展为病症的1改型癌症。我们之前说明了了一四组在首次氢查到多种胰脏自身免疫球抗原样品后至少10年无癌症的太快的发展者，这四组病症人数少，但特点非常明确。随后，我们发现胰脏自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞膜反应以会在的发展加速的病症里面大体不普遍存在，但在近期病症和长期普遍存在的癌症病症里面很容易氢查到。这可能会表明，与的发展病症来得，这些病症自身免疫反应以会的闭环增强。

早期分析表明，尽管闭环性T细胞膜(Treg)数量但会，但癌症病症普遍存在一些动态缺陷，其里面最主要对IL-2的反应以会能力降低。此外，癌症病症里面的震荡CD4+T细胞膜可能会对闭环凸显抵抗性，展现为震荡T细胞膜的抑制作用减弱，自然产生的Treg和形体内产生的正向Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞膜里面IL-2反应以会减弱。本分析的目的是说明了了CD4+闭环性T细胞膜(Treg)在海岸边极加速的发展者里面的特点，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的侧向分析，在21岁表列确诊的病症亲属里面健康检查1改型癌症的可怕因素。我们之前说明了了长期加速的发展者的特点，他们始终保持多重胰脏自身免疫球抗原非典改型多达10年，但很难用到癌症的流行病学病征，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名在此期间始终保持无癌症并希望提供大量血液样品的加速的发展者划定T和B细胞膜动态数据分析。在目前的分析里面，8名慢的发展者(SP四组)，里面位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的胰脏自身免疫球抗原非典改型。所有的组织者都始终保持1改型癌症的发展的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身免疫球抗原对某些淋巴细胞的非典改型反应以会，然而，一名病症已经始终保持2期至少6年，但很难用到流行病学病征，一名病症被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该供形体顺利进行了单独评估。分离外周血单个氢细胞膜(PBMCs)，改用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜抑制作用测试评估供形体里面Treg的基频、表现改型和动态。适用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)顺利进行无全权负责聚类数据分析，评估Treg表现改型。

结果：与有益供形体来得，来自慢的发展形体的心灵CD4+T细胞膜的全权负责聚类结果显示，激活的心灵CD4+ Treg基频增大，与糖皮质激素正向的TNFR相关抗原(GITR)传达增大有关。一名HbA1c升高的病症与的发展加速者和给定的对照四组来得，Treg谱大同小异。动态数据分析表明，与有益供形体来得，来自加速的发展形体的Treg内源性的CD4+震荡T细胞膜抑制作用明显受损。展现为对震荡CD4+T细胞膜CD25和CD134传达的抑制作用增大。

左图1 有系统的表现改型数据分析结果显示，CD4+Treg亚改型在慢的发展路由表里面增大。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上面物传达确认单单10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个路由表象征性一个一个大(100个一个大)，更为大的元一个大(10个元一个大)在路由表四组区域内上色。每个路由表里面的点心左图暗示单个上面的传达层次。(b)每个元聚类的热左图，以结果显示整形体上面传达。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解左图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较总质量为每个metacluster木箱该线左图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。蓝色左上角象征性理应以SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推小写秩氢查。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模改型推测，Treg基频的增大是的发展加速的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP组织者和给定的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的象征性性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(星点)四组以及供形体SP 606(蓝色)里面CD25+ cd127的基频汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外弟集的木箱该线左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达低压着色，箭头突单单的簇被辨识为SP和HD路由表中间的各不相同。(j)木箱该线左图结果显示了在SP(星点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相较总质量(%-)。(k)直方左图结果显示每个簇的表现改型(红色)和Treg上面相较传达与故事情节传达(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。故事情节与所有其他簇里面上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推小写秩氢查

左图3 与有益献血者来得，的发展加速者心灵treg的GITR增大。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)氢查每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的传达热左图(sp606不最主要在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，结果显示直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon类推小写秩和氢查，p< 0.07(蓝色)所有供形体最主要，p< 0.05(蓝色)供形体SP 606和给定的HD不最主要在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从分级除此以外，从所有HD(红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，结果显示直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推小写秩氢查

左图4 来自加速的发展的CD4+ treg细胞膜操控震荡CD4+T细胞膜的能力降低。SP四组用蓝色的该线和左上角暗示，HD四组用黑色的该线和左上角暗示，蓝色的该线/左上角暗示供形体sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按判读的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，培养单单来3同月顺利进行流式细胞膜法术氢查。(a-d)与CD4+这样的话者相较应以的treg培养单单来(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养单单来。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑制作用比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比例。适用非典改型对照(激活的叛离细胞膜另有treg)计算抑制作用比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 震荡CD4+T细胞膜对加速的发展的T细胞膜重置的抑制作用更为敏感。SP四组用蓝色的该线和左上角暗示，HD四组用黑色的该线和左上角暗示，蓝色的该线/左上角暗示供形体sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按判读的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，培养单单来3同月顺利进行流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因弟数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养单单来。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑制作用花红(b)。(c,d) CD25抑制作用花红(c)和CD134抑制作用花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院单单来里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得单单的论断是，来自加速的发展弟的重置心灵CD4+Treg在GITR传达里面取得了拓展和丰富，凸显了进一步分析Treg在1改型癌症后果个形体里面的异质性的必要性。

译者原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28